1、問：斜面低溫保藏法

 答：將待保藏的菌種接種在合適的斜面培養基上,在相應的條件下培養至得到充足的菌體或者孢子,隨后密封試管置于4攝氏度左右保存,具體保存溫度按照保存菌種設定.保藏時間依微生物的種類從1個月到4個月不等.此法適用范圍廣(細菌、霉菌、放線菌、酵母均適用),操作簡便,成本低廉,復蘇方便,人員能隨時對微生物的狀態進行觀察.缺點是保藏時間較短,需要經常傳代處理,因連續傳代而容易引入基因突變或者雜菌,培養基的理化性質及微生物代謝產物等原因還會導致微生物性狀發生改變.因此斜面低溫保藏法適于短期保存常用菌株,而且應該與其他能夠長期保存菌株的方法相結合防止種系丟失.

2.問：液體石蠟保藏法

答：此法是斜面低溫保藏法的一種改進,只需將無菌干燥的液體石蠟注入上述培養好的斜面至高于斜面頂端1厘米處,再將試管密封,直立于4攝氏度左右冷藏保存,具體保存溫度隨菌種而變.注意要定期添加石蠟保證斜面處于液面以下.保藏時間至少可以達到1年(無芽孢細菌、酵母),甚至更長 。液體石蠟保藏法基本上克服了斜面低溫保藏法保存時間短的缺點,然而液體石蠟保藏法由于要試管直立保存,因此比較耗費空間,不便于攜帶。此法要注意以下兩點:①石蠟要保證無水,干熱160攝氏度,2h滅菌后的石蠟可直接使用,若是用高壓濕熱121攝氏度,20分鐘滅菌法滅菌,則要置于烘箱中至水分蒸發,石蠟液體變澄清后再使用；②用接種環取種復蘇時,注意接種環要充分冷卻防止液體石蠟飛濺傷人.

3.問：半固體穿刺保藏法

答：配制半固體培養基,高壓濕熱滅菌后倒于無菌試管中至約1/3,待培養基凝固,用接種環從平面培養基上挑取單菌落,穿入培養基若干次.在合適的條件下進行培養至菌體旺盛生長,之后密封試管,根據菌種特點在4攝氏度左右或者涼爽干燥處保存.保存時間至少可以達到1年,對于有些菌種甚至能達到20年之久.